環(huán)氧乙烷滅菌操作程序

(1) 根據試驗要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內密封包裝，每袋2片。每次試驗用20袋。
(2) 將滅菌器上、中、下3層，每層內、中、外各設一點(diǎn)，共設9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋，共需18袋試驗菌片。另將一袋（2片）菌片放置在室溫條件下作為陽(yáng)性對照。
(3) 按使用說(shuō)明書(shū)所規定的環(huán)氧乙烷濃度、作用時(shí)間、柜內的溫度和相對濕度，在滿(mǎn)載條件下進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌處理。滿(mǎn)載用物品，隨滅菌器用途而定。處理完畢，取出菌片，分別移種于5 ml 營(yíng)養肉湯培養基中，置37℃ 培養箱內培養，7d后觀(guān)察終結果(定性培養檢測)。
對難以判斷結果的營(yíng)養肉湯管，取其中0.2ml懸液接種營(yíng)養瓊脂平板，用無(wú)菌L棒涂抹均勻，置37℃ 培養箱內培養。48h后涂片染色，顯微鏡下觀(guān)察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗，判斷有無(wú)生長(cháng)或生長(cháng)的是否為試驗菌。若為非試驗菌，則應重新進(jìn)行試驗。
(4) 測試中，應同時(shí)設立定性和定量陽(yáng)性對照組與陰性對照組。
(5) 定量陽(yáng)性對照組，以同批試驗用菌片置室溫下，待消毒或滅菌試驗組達規定作用時(shí)間后，立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養計數。
(6) 定性陽(yáng)性對照組，以同批試驗用菌片置室溫下，待滅菌試驗組達規定作用時(shí)間后，立即將該菌片2 片，分別接種于5.0ml 營(yíng)養肉湯培養基，放入溫箱中作定性培養，觀(guān)察有細菌生長(cháng)情況。
(7) 陰性對照組，以同批次試驗用未染菌樣片2 片，分別接種于5.0ml 營(yíng)養肉湯培養基，同時(shí)將未接種過(guò)的營(yíng)養肉湯培養基放入培養箱中作定性培養，觀(guān)察有無(wú)細菌生長(cháng)。
(8) 試驗重復5 次。
(9)在5次試驗中，每次試驗中的陽(yáng)性對照菌片，回收菌量均應在5×10cfu/片～5×10cfu/片；定性陽(yáng)性對照組，細菌生長(cháng)良好；陰性對照應無(wú)菌生長(cháng)。陽(yáng)性或陰性對照若有不符合上述要求的結果，試驗作廢，重新進(jìn)行。